化疗与生物免疫疗法治疗胃癌的疗效及对循环肿瘤细胞（CTC）的影响
材料 激光共聚焦扫描显微镜（Laser scanning confocal microscope，LSC）（美国CompuCyte公司），滤器（德国SARTORIUS公司），8 μm孔径的聚碳酸酯滤膜（英国Whatman公司），异硫氰酸荧光素-兔抗人细胞角蛋白抗体（英国Abcam公司）、藻红蛋白（PE）-鼠抗人CD45抗体（美国e-Bioscience公司），CK8抗体（上海瑞齐生物科技有限公司）；4，6-二米基苯基吲哚（DAPI），MCF-7胃癌细胞株（中科院上海细胞研究所）。
（2）标本采集 首先将标本采集装置进行严格的消毒处理，使用真空采血针采集受检者肘静脉血10 mL，将穿刺后的2 mL肘静脉血弃去。肝素抗凝，4℃中保存，待检。选择SGC-7901人胃癌细胞株構建模拟胃癌患者血样，这样做的目的就是为了与上述采集标本进行对照，使用膜滤过的方法对肿瘤细胞进行富集。
（3）LSC自动扫描和形态学观察 以CK8抗体（上海瑞齐生物科技有限公司）和CD45分别对SGC-7901进行筛选，阳性细胞为CK8（+）CD45（-）。经LSC扫描计数肿瘤细胞水平。
（4）典型CTC判定标准 ①CTC细胞体积比周围白细胞大；②CTC细胞核经DAPI染色，比较明亮，细胞核较大，核浆所占比例较大，核分裂程度较大，且呈病理性核分裂；③经标志物荧光染色，胞浆抗CK19（+）与CD45（-），显示存在较为明显的细胞形态，且具有较为清楚的细胞界限；④细胞核面积与相应胞浆抗原染色部位面积接近。本研究中，将CK19（+）以及细胞数大于1个视为CTC阳性[5]。
1.5 统计学方法
采用SPSS19.0软件对数据进行统计分析，计量资料以（x±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料采用χ2检验，P<0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 两组临床疗效比较
经治疗后，观察组CR、PR、NC及PD例数分别为5例、13例、15例及7例，临床总缓解率为45.00%（18/40）；对照组分别为1例、10例、12例及17例，临床总缓解率为27.50%（11/40）。观察组临床总缓解率显著高于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05），见表1。
2.2 两组患者治疗前后CTC检测结果比较
观察组治疗后CTC检出率显著低于治疗前及对照组治疗后，差异具有统计学意义（P<0.05），见表2。
3 讨论
胃癌是我国最为常见的一种恶性肿瘤，早期诊断率非常低，大部分患者确诊时已为晚期，失去了手术根治的良好机会，即使可以采取手术治疗，但是其术后复发率也非常高[6-8]。因此，对于晚期胃癌患者而言，选择药物治疗非常关键。临床治疗胃癌的主要方法有外科手术、放化疗等，但是上述几种常见治疗方法疗效并不十分理想。随着临床治疗胃癌的技术手段的不断更新与变革，生物免疫治疗技术越来越多地应用于临床疾病的治疗之中，取得了非常理想的效果[9-10]。对于肿瘤的治疗而言，近年来也开始越来越多地将该新型技术用于临床治疗各种类型的肿瘤，该方法治疗肿瘤的重要原理为对机体免疫功能加以调节，不断增强患者机体免疫力，从而杀死肿瘤细胞。
目前，临床上常采用化疗方法对胃癌患者进行治疗，然而化疗治疗存在着诸多缺陷，如患者耐受度差、不良反应发生率高以及终止治疗率较高等方面的缺点，对临床疗效产生极大的影响。此外，化疗在遏制肿瘤细胞生长的情况下，会对机体的免疫功能产生抑制性作用，降低机体自身对肿瘤细胞的杀伤力，同时普通化疗方案只对部分肿瘤细胞具有杀伤性作用，对微小病灶的杀伤，却需要机体自身免疫力来完成。对此，仅凭单纯的化疗方案对胃癌患者实施治疗，其疗效无法达到满意程度。本研究观察组在化疗的基础上采用生物免疫治疗[11-13]。在生物免疫治疗方案中，DC细胞是目前已知的抗原提呈细胞中功能最强大，且能够激活处于静止状态的T淋巴细胞，并促使免疫应答反应得以最大程度启动，其在机体免疫反应之中具有非常明显的调节效果。通过将DC对抗原的摄取能力制作疫苗在体外负载肿瘤相关抗原，疫苗回输时可将肿瘤抗原带回至机体之中，从而激活自身的免疫系统，从而有效提高了抗肿瘤及提高免疫水平的作用。近年来，DC细胞生物治疗已在临床肿瘤治疗中得到了较为广泛的应用，然而也存在着一定的问题，如具体的培养过程、培养剂量、接种方法以及疫苗培养时机等方面，均存在较大的争议。CIK细胞属于一种全新的非主要组织相容性复合物免疫活性细胞，其繁殖能力以及细胞杀伤活性水平均较高，是该细胞与诸多细胞因子共同在机体之外进行培养而获取的异质性细胞，不会被T细胞受体所限制，所以其临床抗肿瘤的优点十分显著[14]。本研究观察组采用DC-CIK生物免疫治疗方案对患者进行治疗，效果十分明显，观察组的临床总缓解率显著高于对照组（P<0.05）；观察组治疗后CTC检出率均显著低于治疗前及对照组（P<0.05）。
CTC检测是临床上一项较为先进的检验技术，其优势主要表现在仅需要通过抽取患者静脉血，便能够对患者体内的CTC的变化情况进行监测。而且通过多年实验室以及临床实践研究表明，学术界对于CTC在与肿瘤的侵袭、转移等存在的联系，以及CTC在预测预后、指导个体化治疗方面的作用等方面均得到了认可[15]。很长一段时间以来，由于实验技术存在一定的局限性，临床上对CTC的检测一直无合适的检测方法，这在很大程度上限制了CTC研究的深入。近年来随着临床检验技术的快速发展，某些CTC检测方法已获得了稳定性、敏感性以及特异性均处于较高水平的结果。目前用于检测CTC的方法有IMS法、密度梯度离心法以及ISET检测法等，有关CTC临床价值的研究也取得了令人鼓舞的结果。由此可以得知，CTC可作为临床判定胃癌患病程度的一个重要指标。
综上所述，化疗联合生物免疫治疗胃癌的临床疗效显著，可有效降低CTC水平，应在临床中进行推广。
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（收稿日期：2017-02-01）