猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染的诊断

疫情，现将整个诊断过程介绍如下。

1发病情况

该猪场为中小型养猪场，其共有种猪120头，仔猪及育肥猪共计600余头，采取自繁自养的养殖模式。2017年10月，该猪场饲养的育肥猪率先发病，发病后7d开始出现死亡，育肥猪发病率达70%左右，死亡率达30%左右，哺乳仔猪及种猪尚未发病。发病后曾利用青霉素和磺胺类药物治疗，无效果。

2临床症状

发病初期表现为食欲减退、精神沉郁、体温升高、扎堆喜卧、眼结膜发绀，随后开始出现食欲废绝、呼吸困难、耳朵、腹部和腿部内侧出现血斑及出血点、后肢瘫痪、站立困难，最后因逐渐消瘦、衰竭至死。

3解剖病变

解剖病死猪可见全身淋巴结肿大且部分具有大理石样变、心包积液、心外膜呈片状出血斑、心房内膜呈针状出血、肾脏肿大且表面呈针尖状出血、胃底部呈溃疡穿孔、小肠溃烂、回盲呈纽扣状溃疡。

4实验室PCR检测

采集病死猪的淋巴结、肾脏、肠黏膜等病变组织，将其溶解于5倍体积灭菌生理盐水中，经捣碎、匀浆后，取上清液进行PCR检测。参照王晓波等报道的多重PCR方法分别合成CSFV和PRRSV的2对检测引物（CSFV上游：5′-GGACCGTTAAGGCCATTTGC-3′，CSFV下游：5′-TATAACACCCGTCCACCCTA-3′：PRRSV上游：5′-ATGGGCGACAATGTCCCTAA-3’，PRRSV下游：5′-CTTGATGACACACCTGCAGG-3′），并按照王晓波等[3]报道的PCR扩增方法进行PCR扩增。结果如图1所示，采集的组织样品经多重PCR扩增后在287bp和374 bp处具有特异性扩增条带，片段大小均与王晓波等报道的CSFV和PRRSV的扩增结果相符，表明采集的组织样品为CSFV和PRRSV阳性。

5综合诊断结果

结合发病情况、临床症状、解剖病变和实验室PCR检测结果确诊这次疫情为CSFV和PRRSV混合感染。

6讨论

近年来，我国养猪业得到了蓬勃发展，但动物疫病综合防控能力的提升相对滞后，主要表现在猪群免疫力和抗病力下降，多种致病原的混合感染更加普遍，临床表现更加复杂，确诊更加困难。其中CSFV和PRRSV混合感染是猪群中较常见的多致病原混合感染之一，其发病率有逐年增多的趋势，快速确诊是疫情能够得到迅速控制的关键。目前，CSFV和PRRSV诊断方法主要有病原分离鉴定、血清学和分子生物学检测方法，其中病原分离鉴定试验周期较长，血清学方法检测快速但确诊疫病具有一定的滞后性，而PCR作为一种常用的分子生物学检测技术已广泛应用于动物疾病的快速诊断，尤其当致病原含量极少时，PCR可以显著提高疾病的诊断水平。多重PCR能在同一反应体系中扩增出2种及以上不同目的基因，与单项PCR相比能够快速、准确地同时检测两种或多种致病原。在本病例的确诊中，采用王晓波等建立的多重PCR方法进行确诊，只需要将2对检测引物加入到一个PCR反应体系中，一步即可完成CSFV和PRRSV的同时扩增，大大节省了檢测时间和检测成本，也使检测结果更加准确、可靠。本病例的快速确诊为养殖场采取疫苗紧急免疫接种等系列针对性治疗措施赢得了时间，为迅速控制疫情提供了技术保障。

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